Enzim DNA Polimerase PolPfu Inventpro
Enzim DNA Polimerase PolPfu Inventpro
- Enzim DNA Polimerase PolPfu Ready Mix
- Enzim DNA Polimerase
Inovator :
Dr Uus Saepuloh, Ssi, Mbiomed
Keunggulan
- High fidelity polymerase
- Low error rate
- Proof reading activity
- Blunt end PCR product
Kegunaan
- Routine molecular diagnostic
- Gene cloning
- Gene expression
- Site directed mutagenesis
Deskripsi
Teknik PCR merupakan salah satu teknik dalam biologi molekuler yang sangat umum diaplikasikan di berbagai laboratorium baik di lingkungan akademis, instansi penelitian pemerintah maupun swasta, serta perusahaan-perusahaan di bidang biomedis dan bioteknologi. Penyediaan reagensia pendukung reaksi PCR sampai saat ini masih sangat tergantung dari produk yang dihasilkan oleh perusahaan-perusahaan luar negeri. Diantara reagensia yang sangat penting perannya dalam teknik PCR adalah enzim DNA polimerase termofil dan enzim reverse transcriptase. Kendala utama penggunaan enzim ini adalah harganya yang mahal dan perlu waktu yang cukup lama untuk proses pemesanannya dari perusahaan (supplier) di luar negeri. Sangat diperlukan adanya usaha penelitian untuk mengembangkan dan memproduksi enzim-enzim tersebut di Indonesia, mengingat belum banyak penelitian kearah sana sehingga ke depan diharapkan kita tidak terlalu tergantung terhadap reagensia-reagensia dari luar.
Inventpro merupakan merk dagang dalam negeri yang menghasilkan produk-produk berupa enzim rekombinan yang berperan dalam bidang-bidang bioteknologi dan biologi molekuler terutama dalam teknik PCR/RT-PCR. Diantara produk yang dihasilkan adalah enzim DNA Polimerase PolPfu dan enzim reverse transcriptase MMLV/SRV2. Enzim-enzim tersebut dihasilkan melalui ekspresi dalam sistem ekspresi Escherichia coli dengan menggunakan sumber DNA berupa gen sintetik. Dipilihnya gen sintetik bertujuan untuk memudahkan dilakukannya konstruksi rekayasa genetik dengan memutasi beberapa sekuens nukleotida. Selain itu, konstruksi rekayasa genetik akan didesain untuk menghindari efek dari individual codon usage (codon preferences) yang akan berpengaruh terhadap efektivitas ekspresi gen mengingat enzim tersebut diekspresikan secara heterolog menggunakan sistem ekspresi Escherichia coli. Keuntungan lainnya menggunakan gen sintetik ini adalah teknologi ini merupakan teknologi sintesis gen (artificial genes) yang relatif baru dan belum pernah dikembangkan enzim rekombinan sejenis asal gen sitetik tersebut.
Keberhasilan teknik PCR sangat dipengaruhi oleh dua komponen reagent utama yaitu reaksi buffer yang optimal dan DNA polimerase thermostable dengan kualitas yang baik. Kualitas enzim DNA polimerase sangat ditentukan oleh: thermal stability, extension rate, fidelity (kemampuan untuk memperbaiki proses penggabungan nukleotida yang salah terhadap cetakannya), dan processivity (kemungkinan terjadinya pelepasan enzim DNA polimerase dari DNA pada saat terjadinya proses extension).
Enzim DNA polimerase asal Pyrococcus furiosus (PolPfu) merupakan salah satu enzim yang digunakan secara luas di laboratorium bioteknologi untuk melakukan amplifikasi DNA pada teknik PCR. Enzim ini bersifat high fidelity karena mempunyai aktivitas proof reading dan mempunya nilai error rate sekitar 1.3 x 10-6 (jumlah terjadinya frekuensi mutase per base pair setiap terjadinya duplikasi). DNA polimerase famili-B dari P. furiosus bersifat termostabil dan mempunyai fidelitas yang tinggi (high-fidelity) sehingga enzim ini sangat berguna jika diaplikasikan pada teknik PCR. Sifat fidelitas enzim PolPfu ini diperkirakan sekitar 10 kali lebih besar dibandingkan dengan enzim DNA polimerase asal Thermus aquaticus (Taq DNA Polimerase) yang sangat umum dipakai pada teknik PCR. Tingginya akurasi sintesis DNA sebagai karakter dari PolPfu disebabkan adanya aktivitas 3'-5' proof reading pada domain eksonuklease.
Enzim DNA Polimerase PolPfu Inventpro merupakan enzim DNA polimerase rekombinan yang dikembangkan dalam sistem ekspresi E.coli berbasis gen sintetik. Enzim ini bersifat high fidelity polymerase sehingga mempunyai kemampuan untuk meminimalkan terjadi kesalahan (erroneous) penggabungan nukleotida terhadap cetakannya pada saat terjadi proses ekstensi utas DNA (growing DNA strand) dan dapat meningkatkan akurasi sintetesis DNA. Enzim DNA polimerase PolPfu Inventpro sangat baik untuk digunakan dalam teknik PCR terutama untuk tujuan cloning gen, ekspresi gen, studi mutagenesis, sekuensing nukleotida, dan teknik lainnya yang memerlukan enzim DNA polimerase dengan aktivitas proof-reading.
